DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I,地高辛檢測試劑盒,DIG High Prime Lab/Detection K
地高辛檢測試劑盒 DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I
貨號: 11745832910
羅氏科學應用部（Roche Applied Science）是*早致力于向用戶提供非放射標記技術的公司之一，讓更多的科研工作者們可以避免使用危險的放射性同位素。自1995年羅氏**的地高辛產品上市以來，盡管陸續有許多出色的競爭者涉足這一領域，盡管有定量PCR技術的應用，DIG系統仍然是非放射性高效標記—檢測技術的**，被廣泛地應用各種膜雜交及原位雜交技術中。
技術原理：
地高辛標記技術源于一種從洋地黃類植物（毛地黃和毛花毛地黃）中提取的類固醇（Steroid）物質—— Digoxigenin （DIG），在醫學上可用于**各種急性和慢性心功能不全以及室上性心動過速、心房顫動和撲動等**。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxigenin在自然界中的**來源，因此抗DIG的抗體不會與其他的生物物質結合，從而可以滿足特異性標記的需要。這一點，正是DIG勝于生物素(Biotin)的地方——同樣是小分子標記物，生物素廣泛存在于各種組織中，對于靈敏度很高的標記檢測實驗來說，樣品自身含有的內源生物素，就會對結果產生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個問題。
技術特點：
與放射性標記和檢測技術相比較，DIG 系統具有一下多個優勢：
è高靈敏度，完全可滿足實驗需要，某些方面甚至可與放射性標記的靈敏度向媲美
è曝光時間短，結果顯示時間以分鐘計算，無需幾小時甚至幾天的自顯影過程
è**環保，不接觸放射性物質，不會對環境造成污染
è探針可重復使用，*少可以穩定儲存一年
è可輕松進行探針撥離和重探
è憑借多年的經驗和眾多使用者的反饋意見，提供**的應用指南
應用領域：
地高辛系統能夠**高效地標記DNA, RNA或是寡聚核苷酸探針，這些探針可以被廣泛地應用在
èSouthern blotting, dot blotting
èNorthern blotting
èArray
èColony hybridization
èIn situ hybridization
èELISA
技術細節：
DIG 通過一個含有11個碳原子的空間臂與尿嘧啶核苷酸上的C5位置相連，一定濃度的DIG標記的核苷酸可以通過DNA polymerase(如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端轉移酶（Terminal Transferase）的作用摻入到核苷酸探針中；也可通過隨即引物標記（random primed labeling）, 缺口平移（nick translation），PCR，3’端標記/加尾或是體外轉錄制備帶有DIG標記的探針。當然也可以通過化學合成的方法進行核苷酸的標記。
Fig. Structure of Alkali-liable Digoxigenin(DIG)-dUTP
對于DIG 標記探針的雜交檢測，可選用連接有堿性磷酸酶（alkaline phosphatase），過氧化物酶(peroxidase),熒光素（fluorescein）,若丹明（rhodamine）或是膠體金（colloidal gold）高親和性的抗DIG抗體共軛物；也可選用不帶任何共軛連接的抗DIG抗體和二級抗體。
檢測的靈敏度主要依賴于對不同抗DIG抗體共軛物顯示方法的選擇。以連接有堿性磷酸酶的抗DIG 抗體為例：即可以使用NBT或BCIP做底物的顯色法，也可以使用HNPP熒光堿性磷酸酶底物，檢測的靈敏度常規可達到0.1pg (Souther blot)。
