探討影響FAME全自動酶免分析系統的檢測因素
作者單位：212001 江蘇省鎮江市中心血站
作者簡介：朱陽泉(1967-)，男，江蘇鎮江人，主管技師，本科，
主要從事輸血傳播**和血型研究。電話：0511-5021106，E-mail：yangquanzhu@yahoo.com。
【摘要】 目的探討3種常見的影響全自動酶免分析系統檢測結果的因素，提高EIISA法檢測結果的準確性。方法(1)隨機選擇對照組和實驗組各44份無償獻血者血樣，分別進行兩種不同方式的抗凝，應用FAME全自動酶免分析系統進行HBsAg、抗一HCV、抗一HIV、TP4個項目檢測，比較兩組檢測結果。(2)在全自動加樣儀的加樣高度設置中，不斷增加加樣高度，觀察FAME對4個質控血清平行孑L的檢測效果。(3)在不同溫度的FAME洗液下，對88份正常的無償獻血者血樣進行4個項目檢測，觀察不同溫度的洗液對檢測結果的影響。結果(1)除抗一HCV外，實驗組中其他3項檢測結果均有假陽性出現，且陰性標本的S／CO值明顯高于對照組(P)
【關鍵詞】FAME全自動酶免系統 EIISA 影響因素
【中圖分類號】R446．1 R446．61 【文獻標識碼】A 【文章編號】l671-2587(2004)04-0254-03
Study of the influential factors on ELISA using the microlabFAME system ZHU Yangquan，X Changgen，DAI Ruidi，
et a1．Zhenjiang Blood Center of Jiangsu Province，Zhenjiang212001
[Abstract] Objective To study the three types of common factorswhich influence the results of the microlab FAM E system on EIISA．M ethods (1)There were 44 random samples in experimental groupand control group respectively，which were anti-curdled in differentlevels．Then FAME was used tO test HBsAg.anti-HCV，anti-HIV and TPrespectively and the difference between the two groups werecompared．(2)W hile increasing the dispensing height of the AT plus2 in series on the basis of original default，the effects caused bythem were assayed after using FAME through four items of parallelquality-controlled sera．(3)The results were detected using FAM Eunder the different temperature of wash solution，through 4 items ofEI ISA on 88 samples of normal voluntary donors．Results (1)In theexperimental group ，fault positive results emerged in three itemsexcept anti-HCV ，and the S f Co of negative samples was much higherthan that i,I control group (P< 0.001)。(2)W hen dispensingheight was lower than 9.1 mm 。fault positive results emerged inanti-HCV ，and the CV of four items were higher than norma1．(3)W henthe wash solution temperature was lower than l4℃ ，the faultpositive results emerged and CV were higher than usual exceptanti-HCV．Conclusion The accurate resuits can be gained only whenthe blood samples were anti-curdled thoroughly，the dispensingheight and the wash solution temperatures were suitable．
[Key words] Microlab FAME system ELISA Influential factors
近年來，很多采供血機構相繼引進了全自動酶免分析系統用于酶聯**吸附試驗(ELISA)檢測，全自動酶**測設備在過程處理的速度、準確性精密度和重復性方面均優于手工操作。本站于1999年引進FAME全自動酶免分析系統及配套ATplus2全自動加樣儀，在使用中發現，除了檢測試劑本身的穩定性、靈敏度和特異性等因素影響檢測結果外，很多操作方面的問題，如樣本抗凝處理、加樣高度設置及不同洗液溫度等環節都會對檢測結果的準確性造成不同程度的影響，甚至得到假陽性或假陰性結果，現報告如下。
一、材料與方法
1、儀器與試劑
DL一5低速離心機(上海安亭科學儀器廠)；AT plus2全自動加樣儀及FAME全自動酶免分析系統(瑞士HAMILTON公司)；FAMEV2.1C和AUSLABV2.5應用軟件由北京AUS-BIO公司提供；HBsAg、抗一HCV、抗一HIV、TP等4種**檢測試劑盒由廈門英科新創科技有限公司提供，均在有效期內使用。操作程序的編制嚴格按試劑盒說明書要求進行，4個項目的室內質控血清由衛生部臨床檢驗中心提供，濃度分別為HBsAg1ng／ml、抗一HCV 2 NCU／ml、抗一HIV 4 NCU／ml、TP 2 NCU／ml，批號0309.
2 、方法
（1）樣本抗凝方法對檢測結果的影響：將88份無償獻血者血樣隨機分為兩組，對照組和實驗組各44份，對照組血樣(m1)和肝素(u)的比例為1：10，實驗組血樣(m1)和肝素(U)的比例為1：2.室溫下，兩組血樣經3000 r／min離心5min后均有較好的分層，血漿呈液態，肉眼觀察兩組血樣無區別。分別在HBsAg、抗一HCV、抗一HIV和TP等4項ELISA檢測項目的酶標板上設空白對照2孔、陰性對照3孔、陽性對照2孑L、質控1孔，其余88孔用于兩組血樣的檢測。若檢測結果為陽性，重新取樣后用相同試劑雙孔復測，若雙孔均為陰性，則確定原檢測結果為假陽性。
（2）加樣高度設置對檢測結果的影響：在AT plus2容器參數編輯過程中，**測量酶標板的孔徑和高度，并進行加樣定位，確保12根一次性加樣針均在對應微孔的中央。在加樣程序編輯中，加樣步驟及加樣體積按試劑說明書要求進行，加樣高度在軟件缺省值(8.1mm)的基礎上分別增加0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mm。檢測樣本用4個室內質控血清替代，各項試驗平行檢測2孔，對照用手工加樣，保證CUTOFF值計算準確。觀察檢測結果是否有假陰性及原始OD值的變異系數(CV)。
（3）洗液溫度對檢測結果的影響：用10℃蒸餾水對濃縮洗滌液進行20倍稀釋，充分混勻，待完全溶解后加入FAME洗液桶，并用37℃水浴箱分別對其水浴加熱至14℃、18℃、22℃、26℃后用于檢測。
樣本選用88份正常的完全抗凝的無償獻血者血樣，為降低因試劑造成的誤差，4個項目在不同洗液溫度下的檢測均采用同一批號的試劑，于2周內完成。觀察檢測結果是否有假陽性及原始OD值的變異系數。
3、 統計學處理采用t檢驗。
二、結 果
1、不同抗凝條件下的兩組血樣經FAME處理后的4項檢測結果見表1.實驗組4個項目的檢測結果中，除抗一HCV外，其他3個項目均有陽性結果出現，經雙孔復測后為陰性，表明均為假陽性，兩組陰性結果的S／CO值比較，除抗一HCV外，其余3項的差異均有顯著性(P<0．001)。
2、不同加樣高度下，4種質控血清的檢測結果見表2.在5種加樣高度中，前3種加樣高度(含缺省值)對檢測結果影響較大，尤其是抗一HCV檢測，有假陰性結果出現。當加樣高度大于9．1mm時，對4項指標的影響較小，CV≤15 。
三、討 論
FAME全自動酶免分析系統克服了手工操作的局限性，避免了人為因素帶來的偶然誤差，使試驗的精密度、重復性、靈敏度、特異性有所提高。但在臨床檢驗工作中，各實驗室的實際情況不盡相同，如果對各實驗環節進行標準化，排除潛在的影響因素，可以*大限度地降低檢測的系統誤差。標本處理的質量直接影響檢測結果的準確性，收縮良好的非溶血、非脂血，且經過充分離心的血清樣本是ELISA試驗的理想標本。但在血站日常工作中，ABO正定型、Rh血型等項目的檢測往往采用抗凝血樣。肝素因抗凝效果好、配制和使用方便而被**。但肝素抗凝血的穩定性差，隨血樣保存時間和溫度改變而有所變化。當肝素比例不充分或血樣保存時間較長時，血漿樣本經FAME孵育后會發生部分纖維蛋白析出，在酶標板微孔中呈凝膠狀，直接影響檢測結果，甚至導致FAME吐板。而抗一HCV因樣本用量少(10ul)，且被多倍稀釋，故所受影響不明顯。由于FAME為封閉式處理系統，此現象不易**作者發現。因此，用肝素抗凝血樣時，抗凝劑必須充足，標本應盡量在24h內檢測。在加樣的準確性方面，加樣儀的加樣高度設置是重要環節之一。不同廠家生產的試劑中，酶標板的孑L徑、高度及精密性都有差異，因此，不同廠家的試劑應具體對待。在加樣編程中，加樣高度應反復摸索，缺省高度只能作為參考。當加樣高度較小時，由于血樣表面的張力作用，易在加樣針尖形成微小掛珠，導致加樣誤差，如果加樣體積較小，則會發生漏加現象(表2中的抗一HCV)，造成假陰性結果；當適當增加加樣高度后，即縮短了加樣針尖與微孔底部的距離，掛珠的血樣接觸到孔底或樣本稀釋液，在重力和液體表面張力的雙重作用下，樣本被完全加入微孔中。但加樣高度的設置不易過高，應隨檢測項目而定，過高會導致不同檢測項目之間樣本稀釋液的交叉污染，可能對檢測結果造成影響。
恰當的洗滌液溫度對保證FAME的洗板效果及檢測結果的重復性有重要意義。在無償獻血者標本中，常常會有較多的不同程度的脂血樣本，一般認為溶血、脂血樣本對ELISA檢測結果影響不大L3。但經進一步研究后發現，洗液在較低溫度下(小于14℃)，FAME的洗板效果明顯減弱，陰性樣本的檢測曲線變寬，嚴重脂血樣本可能會出現假陽性。在寒冷的冬季，當實驗室溫度低于14℃時，即使采取了升溫措施，使實驗室溫度很快達到預定的室溫，但洗液溫度的上升會存在嚴重的滯后現象。因此，有必要對FAME洗液桶進行適當的水浴預溫，使洗液溫度達到18℃后再用于檢測，對保證FAME檢測結果的準確性起重要作用。
四、參考文獻
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