1、Q:要測定打疫苗三次的抗體的變化，當(dāng)ELISA標(biāo)化后，是不是要用同一個抗原的包被濃度，同一個血清的稀釋度，然后看OD值的變化？實驗動物有多個，實驗數(shù)據(jù)又如何處理呢？

A: nanwxd網(wǎng)友觀點：

關(guān)于是不是要用同一個抗原的包被濃度，同一個血清的稀釋度，然后看OD值的變化？

這是肯定的ELISA做得很好的話批間CV都要有10～15％左右，*好用同一個抗原，但對于包被的抗原濃度對OD的影響不是很大，只要不是差別太大即可。抗血清當(dāng)然要用同一個稀釋度了。另外比較的話就必每批，每塊板上的樣品都要伴隨著一個參比品一同做，參比品（自己可以選定一個，如**次**獲得的抗血清憑取一個。當(dāng)然**是有一個間期的，參比品的保存是一個問題，本試驗中用的參比品為抗血清，我想以加入30％甘油-20度凍藏比較穩(wěn)妥）*好還是同一個這樣才能保證實驗結(jié)果的可比性。

分析：

（1）將同 一只動物**不同時間后抗體產(chǎn)生的效價進(jìn)行比較。

（2）由上面可以得出一組數(shù)據(jù)，舉個例子即如某個**間期抗體升高2倍的有多少，升高4，8，16...的各有多少，然后可知大多數(shù)情況下可升高多少，即此種升高率的陽性率，然后再用泊松分布證明此陽性率是否附和總體在這個**間期增高的陽性率，還是由于隨機(jī)誤差的原因使實驗得到了這個結(jié)果。

（3）統(tǒng)計出不同間期的效價水平后，可以用方差分析進(jìn)行總體比較，證明不同間期**的效果差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義；然后再兩兩之間進(jìn)行比較看看**效果*明顯的是哪個間期。

2、Q：血清做個什么樣的稀釋才能保證這個時候由血清的本底反應(yīng)造成的假陰性或者假陽性少呢？用一份血清做瓊擴(kuò)，效價在1：8，沒有達(dá)到很好的結(jié)果，但是這份血清用ELISA測OD值是或許能夠達(dá)到一個很大值，這個問題怎么解決？

A: nanwxd網(wǎng)友觀點：

（1）血清做個什么樣的稀釋才能保證這個時候由血清的本底反應(yīng)造成的假陰性或者假陽性少呢？

本底反應(yīng)一般是造成假陽性，對于假陰性hanyongjun_4675戰(zhàn)友的意思是說實驗中出現(xiàn)了ELISA做出來的是陰性，但瓊脂糖**擴(kuò)散是陽性？是否由于假陰性的存在是有干擾的類似物存在？

（2）ELISA測得的OD值很高，但瓊擴(kuò)，效價不高，只有1：8

這個問題對于不同個動物之間也許會存在，但對于同一個動物身上出現(xiàn)的可能性比較少，出現(xiàn)這種情況原因多為抗體親和力的問題，還有非特異性干擾的因素，對于后者可以做陰性對照進(jìn)行消除，陰性對照可以有兩種方法：a.用沒有**的與被**動物同種的動物的血清做對照。b.對于用了佐劑的，*嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒炘O(shè)計是應(yīng)該用幾只動物只**不加抗原的佐劑，因為佐劑本身也會產(chǎn)生一定的抗體，這種抗體是否會與你**的抗原之間產(chǎn)生交叉反應(yīng)，這也是值得考慮的問題。

此外還需要注意的一個問題是，**早期產(chǎn)生的是IgM，后斯產(chǎn)生的是IgG，那么這就存在這兩種抗體水平的比較。同時也就要注意酶標(biāo)抗抗體的特異性的問題，即有的抗抗體只針對IgG，而有的特異性則不太好。